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米诺环素对人类胶质瘤U87和LN229细胞体外增殖及凋亡的影响

Abstract: 目的探讨米诺环素对人类胶质瘤U87和LN229细胞体外增殖及凋亡的影响,为米诺环素治疗临床胶质瘤提供基础。方法采用MTT法和Brd U标记法检测不同浓度米诺环素(0、50、100、200μmol/L)对人类胶质瘤细胞株U87和LN229细胞增殖水平的影响;软琼脂克隆形成实验检测米诺环素对胶质瘤细胞自我更新能力的影响;通过免疫荧光标记自噬相关蛋白LC3B和Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡法分别检测米诺环素处理胶质瘤细胞中自噬水平和凋亡水平;使用3-甲基腺嘌呤(3-MA)阻断细胞自噬通路后,分别观察米诺环素对胶质瘤细胞自噬水平和凋亡水平的影响;qRT-PCR法和Western blot法检测米诺环素作用下促凋亡蛋白Bax、抑凋亡蛋白Bcl-2的基因和蛋白表达水平。结果米诺环素对人类胶质瘤细胞的增殖和自我更新能力有明显抑制作用,并呈剂量依赖性;米诺环素可诱导人类胶质瘤细胞发生广泛的细胞自噬与凋亡,但凋亡水平呈现剂量依赖性,而不同浓度处理下的自噬水平无显著性差异;使用3-MA阻断自噬通路对细胞凋亡水平、细胞增殖水平和自我更新能力无显著性影响;米诺环素处理后的胶质瘤细胞中Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论米诺环素可以诱导细胞发生自噬和凋亡,进而抑制人类胶质瘤细胞的增殖和自我更新能力,其中主要依赖于细胞凋亡通路的激活。因此,米诺环素可能成为潜在的胶质瘤治疗药物。