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摘要
【目的】克隆Arthrobacter ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶的编码基因（alanine dehydrogenase）,转化至Escherichia coli Rosetta（DE3）中构建可溶性表达alanine dehydrogenase（ald）的工程菌CZR07并优化产酶条件。【方法】提取A.ureafaciens CZ31菌株的全基因组DNA,设计引物扩增出ald基因,与pET-28a连接后导入E.coli Rosetta中表达并纯化重组蛋白,以单因素实验结果为依据,响应面法优化发酵条件。【结果】ald全长为1119 bp,编码含372个氨基酸残基的蛋白质,分子量约为40 kDa,酶活为2.65 U/mg。响应面分析温度、诱导时间及诱导剂浓度的影响强度为IPTG浓度>温度>温度×IPTG浓度>温度×诱导时间>IPTG浓度×诱导时间>诱导时间。CZR07摇瓶发酵最佳条件为温度22°C、IPTG 0.7 mmol/L、诱导时间7 h,此条件下重组酶酶活达到15.23 U/mg,与响应面优化的预测值相似,较优化前提高5.75倍。【结论】克隆并实现了CZ31中ald基因的可溶性表达,采用BBD法优化产酶的诱导条件,获得显著的优化效果,为其他工程菌株产酶条件优化提供借鉴。
- 出版日期2017
- 单位武汉科技大学; 中国科学院广州生物医药与健康研究院; 化学与化工学院
