定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒游离受体夹心ELISA方法的建立与应用

作者：夏文龙; 吴植; 郭长明; 朱善元; 余树培; 张鑫宇; 夏晓莉; 孙怀昌

来源：中国畜牧兽医, 2018, 45(04): 881-887.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2018.04.006

• 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)
• 游离受体
• 夹心ELISA
• 定量检测

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)游离受体定量检测方法,本试验用表达猪唾液酸黏附素(Sn)游离受体的重组腺病毒rAd-Sn4D-Fc感染PK-15细胞,以细胞培养上清纯化的Sn4D-Fc游离受体作为标准抗原,鼠抗猪Sn免疫血清为一抗,生物素标记兔抗猪Sn多克隆抗体为二抗,建立定量检测Sn4D-Fc游离受体的双抗体夹心ELISA方法;用rAd-Sn4D-Fc注射仔猪,定期采集血清进行游离受体检测。结果显示,纯化Sn4D-Fc标准抗原的纯度为94.3%,能被Sn免疫血清识别;一抗的最佳工作浓度为5μg/mL蛋白,二抗的最佳稀释度为1∶4 000,夹心ELISA检测标准抗原的灵敏度为0.4ng/mL,对照抗原无交叉反应;夹心ELISA能从重组腺病毒注射猪血清中检测到Sn4D-Fc游离受体,最高表达量为6.54ng/mL,持续时间为15d。研究结果表明,建立的双抗体夹心ELISA可用于PRRSV游离受体的体内外定量检测。

• 出版日期2018
• 单位江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 扬州大学; 江苏农牧科技职业学院