胆固醇氧化酶PsCO4异源表达、纯化及酶学性质分析

作者：郭倩倩; 高登科; 程晓涛; 路福平; 田之仓优; 秦慧民

来源：中国生物工程杂志, 2018, 38(06): 34-42.

DOI：10.13523/j.cb.20180605

• 胆固醇氧化酶
• 催化活性
• 酶学性质
• 底物特异性

胆固醇氧化酶专一性催化胆固醇为胆甾-4-烯-3-酮,广泛的应用于临床以及食品加工行业。本论文将来源于Pimelobacter simplex的胆固醇氧化酶PsCO4,分别转化到大肠杆菌宿主BL21(DE3)、Rosetta(DE3)和C41(DE3)中,在不同温度(15℃、25℃、37℃)及IPTG诱导浓度(0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L)下异源表达Ps CO4。结果表明,转入Rosetta(DE3)菌株的PsCO4蛋白,在IPTG浓度为0.1mmol/L、15℃下经18h诱导表达,PsCO4可溶性表达量最高(0.63mg/ml)。异源表达的胆固醇氧化酶PsCO4最适温度为30℃,最适pH为7.5。通过TLC,GC-MS检测出Ps CO4催化胆固醇生成胆甾-4-烯-3-酮。以胆固醇和β-谷甾醇、豆甾醇和孕烯醇酮为底物,测定PsCO4对四种底物的催化反应动力学参数,胆固醇kcat/Km为0.08s-1·μM-1分别高于β-谷甾醇(0.04s-1·μM-1)、豆甾醇(0.005s-1·μM-1)和孕烯醇酮(0.02s-1·μM-1)。

• 出版日期2018
• 单位天津科技大学; 生物工程学院; 工业发酵微生物教育部重点实验室