简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达

作者：徐世三; 倪芳; 张少雷; 刘江; 罗大民

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2010, (02): 135-138.

• 简单异尖线虫
• L-样半胱氨酸蛋白酶
• 克隆
• 原核表达 Anisakis simplex
• L-like cysteine protease
• Cloning
• Prokaryotic expression

目的克隆简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因(AsCP)全长,研究其表达特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫表达序列标签L-样半胱氨酸蛋白酶基因的部分信息,设计特异引物,用cDNA末端快速扩增技术扩增3′端部分,获得基因全长序列。根据基因全长序列设计引物,以简单异尖线虫总RNA为模板,RT-PCR扩增AsCP基因编码序列,产物经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,克隆至表达载体pET32а( ),转化大肠埃希菌BL21(DE3)株,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达效果经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果3′端扩增片段大小为1211bp,拼接完...

• 出版日期2010
• 单位厦门大学