小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备

作者：徐红星; 陈东旭; 张雅林; 王敦

来源：环境昆虫学报, 2010, 32(02): 194-198.

DOI：10.3969/j.issn.1674-0858.2010.02.008

• 小菜蛾
• GOBP2
• 原核表达
• 多克隆抗体

本实验提取羽化3d的小菜蛾Plutella xylostella成虫触角总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因,大小为492bp,Blast结果显示与多种昆虫的GOBP2具有较高的同源性。将该基因克隆到表达载体pMAL-c4E中,转化宿主菌TB1(DE3),获得单克隆重组质粒pMAL-c4E-GOBP2。IPTG成功诱导pMAL-c4E-GOBP2表达出约60kDa的融合蛋白。优化诱导条件为3mmol/L终浓度IPTG、6h,可获得大量可溶性蛋白。表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达1:1.28×105。

• 出版日期2010
• 单位西北农林科技大学