Sox30基因敲除致小鼠睾丸间质细胞增殖异常的研究

作者：唐莹; 姜晓; 韩飞; 周洋西; 崔志鸿; 刘晋祎; 杨惠芳^*; 曹佳^*

来源：第三军医大学学报, 2021, 43(11): 1063-1073.

DOI：10.16016/j.1000-5404.202102044

• Sox30
• 小鼠睾丸间质细胞
• TM3细胞
• 细胞周期

目的探讨Sox30基因敲除对小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。方法采用HE染色法观察10周龄Sox30基因野生型(Sox30+/+)、杂合型(Sox30-/+)及纯合缺失型(Sox30-/-)小鼠睾丸组织病理形态;采用免疫组化技术检测睾丸组织中间质细胞特异性表达蛋白3β-HSD的表达水平;采用慢病毒感染及siRNA干扰技术构建Sox30基因过表达及敲低TM3细胞模型,并在此细胞模型基础上分别采用CCK-8法、流式细胞术、RT-qPCR法以及Western blot法检测细胞存活率、细胞周期分布及周期相关基因的mRNA及蛋白表达水平。采用JASPAR数据库预测Sox30与周期相关基因的启动子区结合位点。结果与Sox30+/+和Sox30-/+小鼠比较,HE染色结果显示Sox30-/-小鼠睾丸组织中间质细胞显著增生,同时免疫组化染色发现表达3β-HSD的间质细胞增多。与Vector组相比,Sox30组TM3细胞存活率降低(P<0.05),G1期细胞周期阻滞(P<0.05),同时细胞周期相关基因CyclinD1、Cdk2等mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与Sox30-NC组比较,siSox30-3组TM3细胞存活率增加(P<0.05),G1期细胞周期阻滞恢复(P<0.05),同时细胞周期相关基因CyclinD1、Cdk2等mRNA和蛋白表达水平显著恢复(P<0.05)。JASPAR预测发现CyclinD1、Cdk2的启动子区域均存在Sox30蛋白质可能的结合位点。结论 Sox30基因敲除可导致小鼠间质细胞增殖异常,CyclinD1和Cdk2可能是Sox30调控细胞周期的重要靶基因。

• 出版日期2021
• 单位第三军医大学; 宁夏医科大学; 医药学院; 中国人民解放军陆军军医大学; 西南大学