草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

作者：杜斌^*; 岳绪辉; 罗建芝; 袁学伟; 姚南南; 陈海军; 杨梅; 令狐克勇

来源：食品安全质量检测学报, 2023, 14(16): 205-212.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2023.16.013

• 草甘膦
• 完全抗原
• 单克隆抗体
• 间接竞争酶联免疫分析法

目的 制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法 首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果 GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r2=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration, IC50)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%～110.35%,且相对标准偏差均小于10%。结论 该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于茶叶样本中GLY残留的快速检测。

• 出版日期2023
• 单位贵阳学院