蛋白质氧连糖基化修饰对肿瘤坏死因子α诱导的小鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

作者：李如君; 龚开政; 张振刚

来源：中华高血压杂志, 2017, 25(04): 370-376.

DOI：10.16439/j.cnki.1673-7245.2017.04.015

• 氧连糖基化修饰
• 心肌成纤维细胞
• 核因子κB
• 肿瘤坏死因子α

目的采用肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导心肌成纤维细胞(CF)增殖,探讨快速提高细胞内氧连糖基化(O-GlcNAc)水平对CF功能及P65、核因子κB信号通路负向调控因子TNFAIP3蛋白表达的影响。方法胰酶联合Ⅳ型胶原酶消化成年小鼠心脏组织培养CF,差速贴壁法分离纯化原代CF,波形蛋白免疫荧光染色鉴定细胞类型。将CF分为空白对照组;TNF-α(10μg/L)组;Thiamet-G(150μmol/L)预处理+空白对照组;Thiamet-G(150μmol/L)预处理+TNF-α(10μg/L)组。活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测CF增殖,细胞划痕实验评价迁移能力,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测TNF-α靶基因血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA表达,Western blot检测磷酸化P65(p-P65)、总P65(t-P65)、TNFAIP3蛋白水平。结果原代培养的心脏细胞经波形蛋白免疫荧光染色鉴定为CF,纯度>95%。Thiamet-G预处理CF 2h即可观察到全细胞蛋白O-GlcNAc水平显著升高(3.22±0.32比1.00±0.22,P<0.05);与空白对照组相比,TNF-α处理组可激活核因子κB通路(p-P65增高:3.13±0.27比1.00±0.13,P<0.05),诱导靶基因VCAM-1、MCP-1mRNA表达(4.21±0.37比1.00±0.21,11.26±0.98比1.00±0.32,均P<0.05),明显提高CF增殖及迁移能力(1.74±0.21比0.48±0.11,P<0.05);与TNF-α处理组相比,Thiamet-G预处理后TNF-α诱导的CF增殖及迁移被抑制(1.04±0.07比1.74±0.21,P<0.05),靶基因VCAM-1、MCP-1mRNA表达减少(2.09±0.13比4.21±0.37,3.13±0.85比11.26±0.98,均P<0.05),P65蛋白总水平在12h无明显变化(1.08±0.13比1.00±0.24,P>0.05),但p-P65水平下降(1.82±0.08比3.13±0.21,P<0.05),TNFAIP3蛋白表达显著上调(5.86±0.61比2.95±0.33,P<0.05)。结论快速提高细胞内O-GlcNAc水平对TNF-α诱导的成年小鼠CF增殖和迁移具有抑制作用,其作用机制可能与上调TNFAIP3的表达有关。

• 出版日期2017
• 单位扬州大学; 第二临床医学院