单核细胞增多性李斯特菌iap基因的克隆、表达与p60蛋白的纯化

作者：吕添; 武海涛; 曹正茂; 王小红

来源：食品科学, 2010, (11): 157-161.

• 单核细胞增多性李斯特菌
• iap基因
• 克隆
• 表达
• p60蛋白
• 纯化 Listeria monocytogenes
• iap gene
• clone
• expression
• p60 protein
• purification

以单增李斯特菌基因组DNA为模板,利用自行设计的引物,通过PCR法扩增出单增李斯特菌的iap基因。在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoRⅠ和XhoⅠ2个酶切位点将其克隆到pMD-18T载体上,构建克隆载体pMD-18T-iap。经测序正确后,将iap基因克隆至表达载体pET-28a上构建表达质粒pET-28a-iap。在IPTG诱导下,携带pET-28a-iap的E.coliBL21(DE3)高效表达分子质量约为60kD的可溶性蛋白及包涵体形式的蛋白,其中可溶性蛋白占总p60蛋白含量的76.3%左右。诱导表达的可溶性蛋白通过Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在95.6%以上的重组p60蛋白,...

• 出版日期2010
• 单位华中农业大学