Fas胞外区基因的构建、表达、纯化及多克隆抗体的制备

作者：张佳锴; 孟庆宇; 程小峰; 刘瑞振; 庄国洪

来源：中国生化药物杂志, 2010, (01): 35-39.

• Fas
• 细胞凋亡
• 多克隆抗体 Fas
• apoptosis
• polyclonal antibody

目的构建Fas胞外区(eFas)基因的表达载体,表达纯化重组蛋白,进行多克隆抗体的制备,为进一步功能研究奠定基础。方法通过重叠PCR获得eFas基因的编码序列,构建pET-22b(+)/eFas表达载体,转化大肠杆菌Rosetta-gami,IPTG诱导表达,Ni-NTA柱亲和纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白的纯度。将纯化的eFas融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,通过ELISA方法检测多克隆抗体的效价。结果获得了eFas的编码序列与表达载体,目的蛋白主要在包涵体中表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化的重组蛋白纯度达95%以上。结论eFas融合蛋白基因的构建、表达、纯化以及多克隆抗...

• 出版日期2010
• 单位厦门大学