甘蔗花叶病毒辅助成分-蛋白酶基因原核表达及抗血清制备

作者：许小洁; 于伟鹏; 杨广玲; 韩士玲; 何梦君; 杨旭; 李向东^*

来源：山东农业科学, 2019, 51(03): 87-91.

DOI：10.14083/j.issn.1001-4942.2019.03.018

• 甘蔗花叶病毒
• 辅助成分-蛋白酶
• 原核表达
• 抗血清
• 检测

利用RT-PCR克隆甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus, SCMV) DWK1分离物辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)基因,酶切后连接原核表达载体pEHISTEV,得到重组质粒pEHISTEV-SCMV-HC-Pro。将重组质粒转化大肠杆菌菌株Rosetta,经IPTG诱导后,表达出57 kD的融合蛋白。切胶回收融合蛋白,多点注射法免疫新西兰长耳兔,制备SCMV HC-Pro抗血清。间接ELISA结果表明,该血清效价为1∶8 192。感染DWK1的玉米叶片病汁液稀释128倍时,该血清仍然能够有效检测出HC-Pro。Western-blot检测结果表明,该血清可特异性检测SCMV第Ⅰ组分离物DWK1和第Ⅳ组分离物DWK2,与同属的烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和马铃薯Y病毒(PVY)均无反应。本研究为准确、快速检测SCMV HC-Pro并进一步研究其功能和作用机制奠定了基础。

• 出版日期2019
• 单位山东农业大学