基于AMPK/Sirt1信号通路探讨身痛逐瘀汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠软骨细胞的保护作用

作者：王政臻; 黄俊卿^*; 杨彬^*; 李琳; 董佳安; 杨顺

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(16): 33-42.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230507

• 身痛逐瘀汤
• 膝骨关节炎
• 氧化应激
• 细胞凋亡
• AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)
• 沉默信息调节因子1(Sirt1)

目的：研究身痛逐瘀汤含药血清对膝骨关节炎（KOA）大鼠软骨细胞氧化应激及凋亡的保护作用。方法：50只雄性大鼠分别灌胃给予生理盐水、身痛逐瘀汤低、中、高剂量（1.73、3.46、6.92 g·kg-1）和硫酸氨基葡萄糖（0.3 g·kg-1），连续给药2周后收集血清。构建KOA模型，分离软骨细胞，随机分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清低、中、高剂量组及硫酸氨基葡萄糖组。软骨细胞培养过程中添加磷酸腺苷（AMP）依赖的蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C(10μmol·L-1)，分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清组、Compound C+身痛逐瘀汤含药血清组。5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU）染色检测细胞增殖；原位末端标记法（TUNEL）测定凋亡；DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）水平；比色法测定谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、MMP-13、胶原酶Ⅱ型（ColⅡ）和聚集蛋白聚糖（Aggrecan）mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Weatern blot）检测磷酸化（p）-AMPK及沉默信息调节因子1(Sirt1)蛋白表达。结果：与正常组比较，模型组软骨细胞增殖率、GSH活性、ColⅡ与Aggrecan mRNA表达、p-AMPK和Sirt1蛋白水平显著降低（P<0.01），而ROS水平、MDA含量、TUNEL阳性细胞率、MMP-3与MMP-13 mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较，身痛逐瘀汤含药血清能提高KOA大鼠软骨细胞中EdU阳性细胞数、GSH活性、ColⅡ和Aggrecan mRNA表达水平、p-AMPK和Sirt1蛋白水平（P<0.05,P<0.01），而TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA表达水平则明显降低（P<0.05,P<0.01）。与身痛逐瘀汤含药血清组比较，Compound C+身痛逐瘀汤含药血清组细胞p-AMPK和Sirt1蛋白表达、GSH活性、ColⅡ和Aggrecan mRNA水平明显降低（P<0.01）,TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA水平显著升高（P<0.01）。结论：身痛逐瘀汤含药血清能减弱KOA大鼠软骨细胞氧化损伤，降低细胞凋亡，其保护作用可能与激活AMPK/Sirt1信号通路有关。

• 出版日期2023
• 单位河南中医药大学; 河南省中医院