DEK真核表达载体的构建及其对p53启动子活性的影响

作者：刘婕; 闫志风; 张亚楠; 林娅红; 丁丽华; 叶棋浓

来源：生物技术通讯, 2012, (01): 34-36.

• DEK
• 萤光素酶报告基因
• p53启动子 DEK
• luciferase reporter gene
• p53 promoter

目的:构建DEK的pcDNA3-Flag表达载体,研究其对抑癌基因p53启动子活性的影响。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增DEK编码序列,克隆到pcDNA3-Flag载体,构建成pcDNA3-Flag-DEK,转染293T细胞,Western印迹鉴定pcDNA3-Flag载体介导的DEK的表达,萤光素酶报告基因活性实验研究DEK对p53启动子活性的影响。结果:双酶切实验证实得到pcDNA3-Flag-DEK阳性克隆;Western印迹实验发现DEK在293T细胞内表达;转录活性实验表明在ZR75-1乳腺癌细胞中,DEK呈剂量依赖性抑制p53启动子的活性。结论:构建了DEK的真核表达载体,并发现此表达载体能在ZR75-1乳腺癌细胞中抑制p53启动子活性。

• 出版日期2012-12-31
• 单位中国人民解放军军事医学科学院; 中国人民解放军总医院