杜氏盐藻MAPKK激酶基因DsMAPKKK的克隆、原核表达与纯化

作者：柴晓杰; 刘艺琼; 王逸云; 武天祥; 刘丽颖

来源：中国农学通报, 2015, (23): 53-57.

• 杜氏盐藻
• DsMAPKKK
• 原核表达
• 纯化
• 蛋白印迹 Dunaliella salina
• DsMAPKKK
• prokaryotic expression
• purification
• western blotting

为了进一步研究MAPKK激酶的生理功能,利用RT-PCR技术扩增了Ds MAPKKK的开放阅读框序列,并利用T4连接酶与质粒p GS21a连接,构建了原核表达载体p GS21a-Ds MAPKKK。将该重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导成功表达了融合蛋白。经SDS-PAGE检测,融合蛋白在上清和包涵体中均存在。可溶性蛋白经过GST柱纯化,电泳分析结果表明,在68 k D左右有单一的蛋白条带,说明融合蛋白得到有效纯化。蛋白印迹结果显示在68 k D左右有明显的杂交条带,初步证明纯化的蛋白就是带有GST标签的MAPKK激酶。Ds MAPKKK的成功表达与纯化,为深入探...

• 出版日期2015
• 单位大连海洋大学