带有穿膜肽PTD的重组Oct4的制备及活性鉴定

作者：李红阳; 李晓霞; 余榕捷; 刘晓飞; 王静静; 苏航; 陈建苏

来源：中国病理生理杂志, 2011, 27(09): 1790-1795.

DOI：10.3969/j.issn.1000-4718.2011.09.025

• Oct4
• 诱导全能干细胞

目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4。方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至E.coli ER2566。镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓鼠卵巢(CHO)细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(FRET)检测重组融合蛋白PTD-Oct4结合目的DNA的活性。结果:成功获得目的蛋白PTD-Oct4,其可以成功进入细胞,定位于细胞核内,穿膜效率为(28.3±2.4)%,并具有与目标DNA序列特异结合的能力。结论:制备重组PTD-Oct4为外源蛋白诱导多能干细胞(IPSCs)奠定基础。

• 出版日期2011
• 单位暨南大学