碳阻遏因子CRE对匍枝根霉产纤维素酶调控作用的研究

作者：孟庆婷; 汤斌

来源：中国生物工程杂志, 2016, 36(03): 31-37.

DOI：10.13523/j.cb.20160305

• 碳阻遏因子
• 纤维素酶
• 匍枝根霉
• 转录调控

为研究匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)TP-02中碳代谢阻遏因子CRE对其产纤维素酶的调控特性,从其基因组DNA中扩增得到CRE全长基因,并利用重叠PCR(overlapping PCR)技术将潮霉素B抗性基因(hyg B)插入其中,既破坏cre正常转录又提供了筛选标记。通过电转化将p UCmT-cre-hyg B导入匍枝根霉萌发孢子,经抗性筛选得到△CRE突变株。利用RT-q PCR对此突变株纤维素酶基因转录水平进行研究,发现eg、bg、cbh1和cbh2的转录均有所提高,分别为48.75%、26%、5.6%和38.6%。同时,△CRE突变株的纤维素酶在表达水平上也均高于原菌,其中内切葡聚糖苷酶酶活提高了58.62%。CRE的破坏在一定程度上减弱了碳阻遏效应,其对纤维素酶的调控具有特异性。其中,对内切酶的调控最为显著。此外,△CRE突变株在3%糖浓度下仍高产纤维素酶,这为后续酶系优化及产业化生产提供了一定的依据。

• 出版日期2016
• 单位安徽工程大学