干扰素-γ通过调节分子伴侣干预人淋巴细胞抗原Ⅱ类表达的机制

作者：冯星源; 王炽华; 陈谦; 彭万军; 王素利^*

来源：中国老年学杂志, 2022, 42(24): 6112-6116.

DOI：10.3969/j.issn.1005-9202.2022.24.050

• 干扰素-γ
• 人淋巴细胞抗原Ⅱ类
• 分子伴侣
• B相关转录本

目的 探讨干扰素(IFN)-γ通过调节分子伴侣干预人淋巴细胞抗原(HLA)Ⅱ类表达的机制。方法 培养获取的人黑色素瘤细胞系MelJuSo和IMRS人肺成纤维细胞作为原代细胞。对MelJuSo和IMRS细胞进行转染，生成稳定的MJ-BAT3-V5和MJ-CIITA-V5克隆体，使用Ii-启动子-CAT结构作为报告质粒，转染48 h后酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CAT基因的表达；采用流式细胞术检测HLAⅡ类糖蛋白、HLA-DM和Ii; Western印迹检测BAT3耗尽后Ii的表达，IFN-γ刺激MelJuSo和IMRS细胞后通过Western印迹检测细胞提取物中BAT3的表达；对IFN-γ刺激和未受刺激的细胞免疫沉淀进行代谢标记，采用ELISA检测HLAⅡ、Ii和HLAⅠ表达水平，通过带有V5标记的BAT3(MJ-BAT3-V5)转染MelJuSo克隆细胞，实时聚合酶链反应(PCR)比较转染和未转染MelJuSo细胞中BAT3转录本水平，通过ELISA检测IFN-γ处理诱导的MelJuSo和IMRS细胞中CAT蛋白的表达。结果 对BAT3、Ii和β-actin进行了Western印迹检测，BAT3残带，Ii明显消失；miRBAT3-GFP (miR4BAT3)与BAT3靶载体(miR10BAT3)两种miRBAT3载体导入MelJuSo细胞后，流式细胞术检测其中Ii、HLAⅡ和HLA-DM水平均明显降低(P<0.05);与MelJuSo细胞相比，MJ-BAT3-V5转染细胞的BAT3转录本水平增加了约7倍，在转染BAT3-V5的细胞中HLAⅡ和Ii类蛋白水平均明显升高，而HLA I蛋白水平明显降低(P<0.05);IFN-γ刺激48 h后BAT3蛋白水平明显升高(P<0.05);作为MelJuSo细胞对IFN-γ反应的对照，随着时间的增加检测出Ii的表达也增强，IFN-γ处理使MelJuSo细胞BAT3增加6～7倍，IFN-γ处理使IMRS细胞增加4～5倍，IFN-γ诱引内源性CⅡTA和BAT3在MelJuSo和BAT3-V5细胞中表达，刺激Ii启动子活性，与未受刺激的MelJuSo和BAT3-V5细胞相比，IFN-γ诱导的BAT3-V5细胞产生的CAT数量明显增加，CAT在IFN-γ刺激MJ细胞中的明显增加，与MelJuSo细胞相比，BAT3-V5细胞中CAT表达明显增加，在IFN-γ刺激MelJuSo细胞CAT的表达明显低于IFN-γ刺激BAT3-V5细胞(均P<0.05)。结论 在IFN-γ作用下BAT3通过陪伴CⅡTA来调控HLAⅡ类表达，CⅡTA蛋白稳定性的调控为HLAⅡ类通路的调控提供了一种新的机制。

• 出版日期2022
• 单位三亚市中医院; 海南省第三人民医院