AGEs诱导损伤的血管内皮细胞RAGE、mTOR、NF-κB的表达及滋阴活血解毒方的干预作用研究

作者：颜佳博

来源：硕士, 湖南中医药大学, 2017.

• 滋阴活血解毒方
• AGES
• VEC损伤
• RAGE
• mTOR
• NF-κB

[目的]观察滋阴活血解毒方与抑制剂合用时对糖基化终末产物（AGEs）诱导损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的蛋白表达及核因子κB（NF-κB）核转移的影响,从RAGE和mTOR的表达调节和NF-κB的核转移阳性率状况方面探讨滋阴活血解毒方对于血管内皮细胞损伤的保护作用及机制。[方法]培养的HUVEC细胞以100mg/ml的AGEs诱导损伤24h,随机分为5个组,其中一组为模型细胞组,除模型细胞组外,其中随机选取三组分别加入RAGE抑制剂FPS-ZM1、NF-κB抑制剂PDTC和mTOR抑制剂雷帕霉素（RAP）,余下一组加入50mg/ml滋阴活血解毒方浓缩药液。干预12h后用光学显微镜观察各组细胞形态变化,以western-blot法检测RAGE和mTOR的表达,以免疫组化方法检测NF-κB核转移状况。[结果]1.光学显微镜下观察,细胞未添加AGEs前表现为梭形单层生长,镶嵌排列,彼此不重叠,胞膜明显,细胞明亮,融合后的细胞镜下为单层鹅卵石状排列;细胞添加AGEs后12h细胞内出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化;抑制剂组及中药组都表现出不同程度的逆转这种损伤的作用,见梭形正常细胞较多,圆缩形细胞减少,重叠细胞减少,细胞内异常增殖减少,变形皱缩细胞减少,胞膜明显,细胞内粗糙样颗粒减少。2.与模型细胞组相比,各组HUVEC细胞RAGE表达水平、mTOR表达水平、NF-κB表达水平均有显著降低,差异均具有统计学意义（p<0.01）。[结论]在AGEs诱导的内皮细胞损伤中,滋阴活血解毒方能降低RAGE,NF-κB,mTOR的表达,从而降低AGEs对内皮细胞的损伤。这种更为显著的保护作用可能与滋阴活血解毒方对于RAGE、NF-κB、mTOR三条信号通路的阻断作用有关。这可能说明,滋阴活血解毒方能对RAGE、NF-κB、mTOR这三条信号转导途径起到一定的抑制作用。

• 出版日期2017
• 单位湖南中医药大学