灰产色链霉菌海藻糖合成酶的自诱导表达及两阶段温度控制发酵的优化

作者：杨鑫; 吴茜; 崔怀言; 徐娴; 朱丽英; 江凌

来源：食品与发酵工业, 2015, 41(05): 14-18.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201505003

• 海藻糖合成酶
• 自诱导发酵
• 两阶段温度控制策略

克隆灰产色链霉菌海藻糖合成酶基因(tres),导入大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并对重组菌自诱导发酵条件进行优化。采用简并PCR的方法扩增灰产色链霉菌海藻糖合成酶基因(tres),将tres基因和表达载体p ET28a连接,构建重组质粒p ET28a-tres,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选重组子进行自诱导表达。利用HPLC法测定酶活研究温度对自诱导发酵海藻糖合成酶催化酶活的影响。该研究成功构建了重组大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌自诱导表达最优发酵条件:采用两阶段温度控制,37℃培养2.5 h,25℃继续培养14 h,并添加3%乙醇,酶活达到1.29×104U/m L,与传统IPTG恒温培养方式相比酶活提高了55.25%,海藻糖得率达71%。

• 出版日期2015
• 单位南京工业大学