大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中转染效率的测定

作者：林慕之; 刘兴德; 张璐; 刘姿麟; 刘志琴; 况春燕

来源：重庆医学, 2018, 47(20): 2709-2713.

• 瞬时感受器电位C离子通道4
• shRNA
• 重组腺病毒载体
• 内皮祖细胞

目的构建大鼠shRNA-TRPC4重组腺病毒载体并观察其在大鼠内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率。方法针对大鼠TRPC4序列设计4个RNA干扰靶点序列并合成双链DNA oligo,连接入干扰载体后转入大肠杆菌感受态细胞,培养后挑取转化子进行PCR鉴定及测序比对。利用Admax包装系统获得重组腺病毒Ad-shRNA-TRPC4小量扩增并测定病毒滴度,检测重组腺病毒对TRPC4表达的影响,最后将获得的重组腺病毒转染EPCs,在荧光显微镜下观察并用流式细胞仪测定其转染效率。结果 4组干扰质粒经培养后的转化子中均有阳性克隆,且阳性克隆与设计的干扰靶点序列一致;4组目的质粒均可抑制TRPC4蛋白的表达,合成的Ad-shRNA-TRPC4病毒滴度为5×1010 ifu/mL;倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测重组腺病毒在大鼠EPCs的转染效率分别为(85.47±2.05)%和(67.27±2.94)%。结论本实验成功构建Ad-shRNA-TRPC4载体,其在EPCs的转染效率高。

• 出版日期2018
• 单位贵州医科大学; 贵州省人民医院