敲减长链非编码RNA MIR4697HG抑制骨髓间充质干细胞成脂向分化

作者：帅婷; 刘娟; 郭艳艳; 金婵媛^*

来源：北京大学学报(医学版), 2022, 54(02): 320-326.

DOI：10.19723/j.issn.1671-167X.2022.02.020

• 骨髓间充质干细胞
• 长链非编码RNA
• MIR4697HG
• 成脂向分化

目的：初步探究长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)MIR4697宿主基因(MIR4697 host gene,MIR4697HG)对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells, BMSCs)的成脂向分化调控作用。方法：将BMSCs进行成脂诱导，在不同的时间点(0、1、2、3、5、7、10 d)收集RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术检测成脂分化调控相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhanced binding proteinα,CEBP/α)、脂联素(adiponectin,ADIPQ)编码基因的mRNA以及lncRNA MIR4697HG的表达水平。为了防止脱靶效应，本研究构建了两条不同序列的MIR4697HG shRNA (shMIR4697HG-1, shMIR4697HG-1)并通过慢病毒感染BMSCs,建立MIR4697HG稳定敲减的BMSCs细胞系。采用油红O染色、蛋白质印迹实验和qRT-PCR等方法检测敲减MIR4697HG对BMSCs成脂分化能力的影响。结果：体外诱导BMSCs成脂向分化时，成脂标志基因PPARγ、CEBP/α和ADIPQ表达量均显著升高，在此过程中lncRNA MIR4697HG表达也明显增加(P<0.01)。慢病毒感染BMSCs 72 h后，荧光显微镜下可以观察到90%以上细胞成功表达绿色荧光蛋白，qRT-PCR结果显示MIR4697HG敲减效率高于60%;BMSCs敲减MIR4697HG后，在BMSCs成脂诱导7 d时，成脂基因PPARγ、CEBP/α和ADIPQ的转录物(mRNA)水平显著下降(P<0.01),同时PPARγ和CEBP/α的蛋白质水平也显著降低(P<0.01)。敲减MIR4697HG的BMSCs成脂向分化能力减弱。结论：lncRNA MIR4697HG对BMSCs成脂向分化有调控作用，敲减MIR4697HG可抑制BMSCs的成脂向分化，提示lncRNA MIR4697HG可能成为治疗骨质疏松症等成脂肪异常疾病的潜在靶点。

• 单位
  北京大学; 首都医科大学附属北京友谊医院