大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质

作者：李倩; 徐美娟; 夏海锋; 饶志明

来源：食品与生物技术学报, 2011, (02): 267-272.

• 大肠杆菌
• 克隆表达
• 苹果酸脱氢酶
• 纯化
• 酶学性质 Escherichia coli
• cloning and expression
• malate dehydrogenase(MDH)
• purification
• enzymatic properties

以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶(mdh)编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000。选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶(mdh),纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适pH值为6.0,在pH值2.0~6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好。K+对酶有明显的激活作用,Cu2+对酶有抑制作用,Hg2+和Zn2+对酶有很强的抑制作用。醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性。酶动力学参数以草...

• 出版日期2011
• 单位江南大学