奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素前体蛋白的克隆与表达

作者：丁炜东; 曹丽萍; 吴婷婷

来源：生物技术, 2005, (06): 14-17.

• 奥利亚罗非鱼
• 促性腺激素释放激素
• 促性腺激素释放激素相关肽
• 原核表达
• 纯化

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。为研究GnRH对性腺发育的作用,构建了GnRH cDNA的原核表达载体并进行融合表达。利用RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400bp的目的序列GnRH基因,克隆至T载体中,经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,并在大肠杆菌TB1中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的41.6%。菌体经溶菌酶裂解,制备无细胞抽提液,Amylose-sepharose柱层析后得到分子量为56kD单一条带的目的蛋白。目的蛋白经Factor Xa酶切裂解,Amylose-sepharose过柱纯化后得到纯化的GnRH前体蛋白。该研究为鱼类GnRH蛋白的控制性腺成熟和抗体制备打下了基础,是国内鱼类GnRH前体蛋白在原核细胞中成功表达的首次报道。

• 出版日期2005-12-20
• 单位中国水产科学研究院淡水渔业研究中心