Orai1蛋白介导钙池操纵的钙内流在脓毒症小鼠CD4+T细胞免疫功能损害中的作用

摘要

目的探讨Orai1介导钙池操纵的钙内流(SOCE)在脓毒症小鼠CD4+ T细胞免疫功能损害中的作用。方法采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症模型, 分别于术后1、3、5 d 处死小鼠, 无菌留取脾脏, 免疫磁珠法分选CD4+ T细胞, Western印迹法检测各组脾脏CD4+ T细胞Orai1蛋白表达, 流式细胞术检测SOCE, 流式细胞术检测CD4+ T细胞凋亡, CCK-8细胞计数试剂盒检测CD4+ T细胞增殖, 酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4水平。然后调节Orai1蛋白的表达, 实验分为4组, sham组、CLP3组、Orai1下调组(Orai1-down组)、Orai1上调组(Orai1-up组), 进一步检测小鼠脾脏CD4+ T细胞SOCE和免疫功能。结果 sham组脾脏CD4+ T细胞Orai1蛋白的相对表达量为1.03±0.16, 与sham组相比, CLP组的Orai1蛋白水平明显降低(F=19.64, P=0.000 5)。与sham组相比, CLP组SOCE水平明显降低(F=30.01, P=0.001)。sham组的CD4+ T细胞早期和晚期凋亡比率为8.7%±1.5%, 与sham组相比, CLP组明显升高(F=32.29, P=0.000 1)。与sham组相比, CLP组小鼠脾脏CD4+ T细胞增殖能力明显降低, 差异有统计学意义(F=7.26, P=0.001 8)。与sham组相比, CLP组小鼠脾脏CD4+ T细胞分泌IFN-γ和IL-4的能力均明显降低, 差异均有统计学意义(F=19.690、6.183, 均P<0.05)。与sham组相比, CLP组IFN-γ/IL-4比值变小(F=11.23, P=0.003 1)。与CLP3组相比, Orai1-down组CD4+ T细胞SOCE的水平明显下降, 早期和晚期凋亡比率明显升高, 脾脏CD4+ T细胞增殖能力显著下降, 分泌IFN-γ和IL-4下降, IFN-γ/IL-4值下降, 差异均有统计学意义(t=4.819、7.952、2.988、28.760、3.140、7.670, 均P<0.05);而Orai1-up组则均获得相反的结果, 差异亦均有统计学意义(t=2.983、6.796、9.390、19.670、3.692、15.870, 均P<0.05)。结论 Orai1介导SOCE减轻脓毒症小鼠CD4+ T细胞免疫功能障碍。

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