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摘要
目的:制备抗人LOC51255单克隆抗体,并构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,了解LOC51255在人肝癌细胞株HepG2中的亚细胞定位情况,为进一步研究其功能提供实验工具和基础。方法:以纯化的重组蛋白pET28b/LOC51255为抗原,免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备LOC51255单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定;通过构建含红色荧光蛋白(pDsRed1)的pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,转入人肝癌细胞株HepG2表达重组蛋白,并对LOC51255进行亚细胞定位。结果:成功建立2株稳定分泌抗LOC51255单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA检测抗LOC51255单克隆抗体的腹水效价分别为1∶12 800和1∶25 600。2株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。通过Western blot实验证实,2株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性LOC51255蛋白。荧光显微镜观察发现LOC51255主要定位于HepG2细胞的细胞浆。结论:成功制备了2株效价高、特异性好的抗LOC51255单克隆抗体,制备的单克隆抗体可用于LOC51255蛋白的鉴定;亚细胞定位分析证实LOC51255主要表达于HepG2细胞的胞浆,为LOC51255的生物学功能研究奠定了基础。
