口蹄疫病毒3D基因的克隆表达及功能分析

作者：张倩; 顾潮江; 石立立; 李勇; 屈三甫; 郑从义

来源：Virologica Sinica, 2006, (04): 375-379.

• 口蹄疫病毒
• RNA依赖的RNA聚合酶
• 体外复制实验
• 荧光定量PCR Foot-and-mouth disease virus(FMDV)
• RNA-dependent RNA polymerase
• Replication system in vitro
• Strand-specific real-time RT-PCR

利用RT-PCR技术扩增了口蹄疫病毒(FMDV)编码RNA依赖的RNA聚合酶的3D基因,并将其克隆到原核表达质粒载体pET-28a(+)中。3D基因经测序确认后在大肠杆菌BL-21中表达,表达产物纯化的目的蛋白进行Western-blotting检测,获得分子量约55KDa的单一3D基因表达产物。利用RNA体外复制体系和荧光定量PCR技术,证明纯化的3D基因表达产物RNA依赖的RNA聚合酶具有较高的酶活性,可以在体外从头合成FMDVRNA,且主要以引物依赖的方式合成病毒基因组。

• 出版日期2006
• 单位武汉大学; 生命科学学院; 病毒学国家重点实验室