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摘要
目的探讨脱细胞胆管细胞外基质(ECM)的制备方法及其替代胆总管缺损的可行性。方法采用4因素3水平9次实验的正交设计[L9(3~4)],切取活体犬的肝外胆管39段,每段长1 cm,其中27段按正交设计随机分为9组行脱细胞处理,试验重复3次。采用苏木素-伊红(HE)染色及计算机图像分析对 ECM 进行残余细胞成分计数,进行极差分析及方差分析,获得制备ECM 的最佳方案。另12段胆管按最佳方案制备成 ECM 并用于同种异体胆总管缺损修复实验。分别手术后2、4、12及24周取材观察缺损修复处组织再生情况。结果脱细胞后第7、9组未发现残余细胞,ECM 富含胶原,第9组胶原呈立体交叉交联。移植术后2周,ECM 内膜面见少量单层上皮细胞,有血管长入其中,ECM 中有少量成纤维和平滑肌细胞,吻合口处有较多炎性细胞浸润;4周ECM 管腔被上皮细胞覆盖,排列整齐,ECM 中有较多成纤维和少量平滑肌细胞,吻合口有少量炎性细胞浸润;12周吻合痕迹消失,ECM 中有较多成纤维、平滑肌细胞和少量纤维细胞;24周 ECM 中有以平滑肌细胞和纤维细胞为主,少量成纤维细胞,结构近似正常。结论制备 ECM 中3个关键条件的最佳水平为 A3B3C3,即在胆管脱细胞处理过程中采用0.4%胰蛋白酶、1.0%叠氮二苯基磷(DPPA)、40 U/ml DNA 酶。所得 ECM 应用于犬同种异体胆总管端端吻合修补,效果满意。
- 出版日期2007
- 单位北京大学
