抗H5N1亚型高致病性禽流感猴源噬菌体scFv的构建和表达

作者：陈樱; 邓国华; 陈化兰

来源：中国预防兽医学报, 2010, (04): 249-253.

• 猴源scFv
• 重叠延伸PCR
• 噬菌体抗体库
• 间接免疫荧光 rhesus macaque single-chain antibody
• SOE PCR
• phage antibody library
• IFA

为探索治疗禽流感的方法,本实验从免疫H5N1亚型禽流感疫苗的猕猴淋巴细胞中提取总mRNA并扩增重链和轻链可变区(VH、Vλ和Vκ),用重叠延伸PCR方法构建VH-Linker-Vλ和VH-Linker-Vκ形式的单链抗体(scFv),采用噬菌体展示技术构建了噬菌体抗体库,从2.2×106的噬菌体库中淘选得到具有较高亲和力的H6株scFv,并通过ELISA、SDS-PAGE、western blot、间接免疫荧光(IFA)和竞争抑制ELISA对其进行鉴定,证实所获得的scFv为32ku,并且能与病毒发生特异性结合。IgBlast序列分析发现,所得到的scFv基因Vλ与人免疫球蛋白胚系基因同源性达...

• 出版日期2010
• 单位中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 农业部