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摘要
目的 探讨长非编码RNA母系表达基因8(lncRNA MEG8)通过调控miR-363-3p/人类配对盒基因6(PAX6)轴促进非小细胞肺癌(NSCLC)的肿瘤进展。方法 选取116例经确诊为NSCLC患者的肿瘤组织与癌旁正常组织标本,常规培养人NSCLC细胞株A549、H1299,采用RT-qPCR法检测组织和细胞中lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6 mRNA的表达。将A549、H1299细胞分别分为对照组(control组,空白培养基处理)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-MEG8组(转染pcDNAMEG8)、pcDNA-MEG8+miR-NC组(pcDNA-MEG8与miR-NC共转染)、pcDNA-MEG8+miR-363-3p mimic组(pcDNA-MEG8与miR-363-3p mimic共转染)。CCK-8法检测培养24,48,72 h各组细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和PAX6蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验分别验证MEG8和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6的关系。RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6之间的结合。结果 与正常组织相比,肿瘤组织中lncRNA MEG8、PAX6 mRNA高表达,miR-363-3p呈现低表达(均P<0.05)。与control组和pcDNA组相比,pcDNA-MEG8组培养48,72 h A549和H1299细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白显著降低(P<0.05)。与pcDNA-MEG8组和pcDNA-MEG8+miR-NC组相比,pcDNA-MEG8+miR-363-3 mimic组培养48,72 h A549和H1299细胞增殖能力、细胞迁移率、PAX6、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),miR-363-3p表达、细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-NC+MEG8-WT共转染组相比,miR-363-3p mimic+MEG8-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);与miR-NC+MEG8-MUT共转染组相比,miR-363-3p mimic+MEG8-MUT共转染组荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。与miR-NC+PAX6-WT共转染组相比,miR-363-3p mimic+PAX6-WT共转染组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);与miR-NC+PAX6-MUT共转染组相比,miR-363-3p mimic+PAX6-MUT共转染组荧光素酶活性无显著性差异(P>0.05)。RIP实验结果显示,与IgG处相比,lncRNA MEG8和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6均主要富集在Ago2处,IgG处与Ago2处的lncRNA MEG8、miR-363-3p和PAX6RNA相对表达水平均具有统计学差异(P<0.05),提示lncRNA MEG8和miR-363-3p、miR-363-3p和PAX6能靶向结合。结论 过表达lncRNA MEG8可能通过下调miR-363-3p并促进PAX6蛋白的表达,进而促进NSCLC的进展。
- 出版日期2023
- 单位广东医科大学附属医院
