hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证

作者：史春梅; 徐广峰; 宋桂仙; 季晨博; 陈玲; 杨蕾; 庞玲霞; 赵亚萍; 郭锡熔

来源：临床检验杂志, 2013, (07): 503-506.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2013.07.007

• hsa-miR-26b
• 海绵体载体
• 双荧光素报告系统
• 人脂肪细胞 hsa-miR-26b
• sponge vector
• dual-Luciferase reporter assay system
• human adipocyte

目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%...

• 出版日期2013
• 单位南京医科大学第一附属医院; 南京医科大学附属南京妇幼保健院; 南京医科大学