氧化应激下黑素细胞自噬相关基因差异表达分析

作者：龚晴丽; 李雪; 丁高中; 凌雨婷; 赵文娥; 熊喜喜; 鲁严^*

来源：中华皮肤科杂志, 2017, 50(08): 547-552.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2017.08.001

• 黑素细胞
• 自噬
• 过氧化氢
• 氧化性应激
• 寡核苷酸序列分析
• 细胞凋亡

目的探讨过氧化氢(H2O2)对黑素细胞自噬的影响及可能的调节机制。方法取对数生长期健康人黑素细胞, 分为空白对照组(不予任何处理)、阳性对照组(100 nmol/L西罗莫司处理)和实验组(体积分数为10-7 ～ 10-3的H2O2处理), 处理4 h后, 使用CCK8法、流式细胞仪分别检测各组黑素细胞活性及凋亡率。吖啶橙染色检测自噬小泡, 透射电镜下观察自噬小体, Western印迹检测自噬特异性蛋白Beclin 1、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)。最后采用包含84个自噬相关基因的RT2 Profiler PCR Array筛选自噬相关的差异表达基因。结果黑素细胞分别经10-3、5 × 10-4、10-4、5 × 10-5、10-5、5 × 10-6、10-6 H2O2处理后, 细胞增殖活性及凋亡率与空白对照组相比差异均有统计学意义(F值分别为286.95、301.23, 均P<0.05), 且随H2O2体积分数升高, 增殖活性降低, 凋亡率升高。除5 × 10-6 H2O2组分别与10-5、10-6 H2O2组间相比细胞凋亡率差异无统计学意义外, 上述各H2O2组间两两比较, 黑素细胞增殖活性及凋亡率差异均有统计学意义(P < 0.05)。吖啶橙染色及电镜观察发现, 10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司处理的黑素细胞中有自噬小体形成。Western印迹显示, 10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司组黑素细胞Beclin 1表达量和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比率均较空白对照组显著升高(P<0.05)。RT2 Profiler PCR Array结果显示, 与空白对照组相比, 10-5 H2O2组、10-6 H2O2组和西罗莫司组中ATG12、ATG3、ULK1、PIK3CG、PTEN、PIK3C3表达均显著上调, EIF2AK3表达显著下调;10-5 H2O2组和西罗莫司组mTOR表达显著下调, ULK2表达显著上调;10-6 H2O2组mTOR表达未发生明显改变, AMPK、JNK1表达显著上调。结论体积分数为10-5和10-6的H2O2均能有效诱导黑素细胞自噬, 可能与影响相关信号分子表达相关。

• 出版日期2017
• 单位南京医科大学第一附属医院; 南京医科大学