丹参二萜合酶基因CPS4的原核表达体系优化及活性蛋白纯化

作者：靳保龙; 崔光红; 党伯岳; 刘世会; 漆小泉

来源：中国实验方剂学杂志, 2014, (10): 94-98.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.2014100094

• 丹参
• 原核表达
• 正交试验
• 纯化 Salvia miltiorrhiza
• prokaryotic expression
• orthogonal experiment
• purifying

目的:优化丹参柯巴基焦磷酸合酶基因家族新基因CPS4的原核表达体系并对重组蛋白进行纯化。方法:对2种原核表达菌株进行比较。对诱导条件,包括异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导时宿主菌的密度(A600)和诱导时间进行正交试验。利用HisTrap HP蛋白纯化柱对重组蛋白进行纯化。结果:Escherichia coli Tuner(DE3)表达菌株能诱导产生更多的可溶重组蛋白。最佳诱导表达条件为诱导时宿主菌的A600值0.7,IPTG浓度0.2 mmol·L-1,诱导表达时间10 h。HisTrap HP蛋白纯化柱纯化时梯度洗脱能得到纯度高的重组蛋白。结论:利用此优化体系可得到足...

• 出版日期2014
• 单位中国中医科学院; 中国科学院植物研究所; 贵州大学