微小牛蜱Bm86基因的克隆与原核表达

作者：樊瑞泉; 罗建勋; 杨孝朴; 殷宏; 高金亮; 关贵全; 刘志杰; 党志胜; 马米玲; 任巧云; 刘爱红

来源：甘肃农业大学学报, 2007, 42(1).

DOI：10.3969/j.issn.1003-4315.2007.01.004

• 微小牛蜱
• Bm86基因
• 克隆
• 表达

根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97 %和95.6 %.然后对重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86进行双酶切,获得带有粘性末端的Bm86基因片段,并将此片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Bm86,将其转化到BL21宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测表明表达产物为分子量为88Ku的融合蛋白,目的蛋白约占蛋白总量的39 %,表达量约为1.08mg/mL.Western blot分析表明此表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别.

• 出版日期2007
• 单位中国农业科学院; 中国农业科学院兰州兽医研究所