AKT2基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定

作者：崔勇; 陈静; 王君玉; 王麒; 胡国汉; 骆纯; 卢亦成

来源：现代生物医学进展, 2011, (08): 1413-1416.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2011.08.003

• 丝/苏氨酸蛋白激酶2
• RNA干扰
• 短发夹结构RNA
• 慢病毒载体 AKT2
• RNA interference
• Short hairpin RNA
• lentiviral vector

目的:构建丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体。方法:利用公用网站按照RNAi序列设计原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经MluI和ClaI进行酶切后的PLVTHM载体连接产生shRNA慢病毒载体。应用shRNA慢病毒载体转染293T细胞及U87细胞,测定病毒滴度,流式细胞仪测定U87细胞的转染效率,PCR及Western blot鉴定AKT2基因在U87细胞中的下调作用。结果:成功构建了shRNA-AKT2慢病毒载体,经测序与设计合成的靶向链完全一致。荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90%,病毒滴度为3....

• 出版日期2011
• 单位中国人民解放军第二军医大学