Notch-1基因敲除兔骨髓间充质干细胞可阻止椎间盘退行性变吗?

作者：莫日格乐; 邵增务

来源：中国组织工程研究, 2013, 17(36): 6403-6408.

DOI：10.3969/j.issn.2095-4344.2013.36.004

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• Notch-1
• 转化生长因子
• 基因敲除
• 退变椎间盘
• 甲苯胺蓝染色
• Ⅱ型胶原
• 蛋白多糖
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背景:前期实验证明退变椎间盘内Notch-1基因高表达,但骨髓间充质干细胞向髓核样细胞转化时Notch-1的作用尚不明确。目的:观测Notch-1基因敲除后的骨髓间充质干细胞修复退变椎间盘的作用。方法:①4只体质量0.4-0.5 kg新西兰兔麻醉后,取股骨骨髓,以密度梯度离心法分离培养骨髓间充质干细胞。②将针对Notch-1的shRNA及无意空质粒shRNA,瞬时转染入骨髓间充质干细胞,转化生长因子β1诱导转染骨髓间充质干细胞分化。③体质量1.0-1.5 kg新西兰兔10只,对兔脊柱L3-4、L4-5、L5-63个椎间盘行穿刺抽吸髓核组织造模,将细胞分为转化生长因子β1诱导转染空质粒组、转化生长因子β1诱导转染shRNA-Notch-1质粒组、转化生长因子β1诱导无转染组细胞,于造模2周后分别移植入L3-4、L4-5、L5-63个椎间盘。结果与结论:①细胞移植4周后MRI检测发现,L3-4(无转染组)及L5-6(空质粒组)%T2加权像扫描(%ST2WI)值有明显增加,L4-5(shRNA-Notch-1质粒组)%ST2WI值增加最为显著,与其他2组比较差异有显著性意义(P<0.05)。②甲苯胺蓝染色可见L4-5(shRNA-Notch-1质粒组)椎间盘组织内蛋白多糖的表达显著高于L3-4(无转染组)及L5-6(空质粒组)。③RT-PCR和Western blot检测发现L4-5(shRNA-Notch-1质粒组)椎间盘内Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达明显高于L3-4(无转染组)及L5-6(空质粒组),差异有显著性意义。结果提示兔退变椎间盘内移植Notch-1基因敲除兔骨髓间充质干细胞,有效修复了退变的椎间盘组织。

• 出版日期2013
• 单位华中科技大学同济医学院附属协和医院