小鼠载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及抗血清的制备

作者：鞠传静; 宋成伟; 万家余; 姜久菊

来源：中国生物制品学杂志, 2009, (05): 470-473.

• 载脂蛋白A-Ⅰ
• 原核表达
• 抗血清 Apolipoprotein A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ)
• Prokaryotic expression
• Antiserum

目的原核表达小鼠载脂蛋白A-Ⅰ(ApoA-Ⅰ),并制备抗血清。方法应用RT-PCR方法从小鼠肝脏中扩增ApoA-Ⅰ基因,亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni2+-NTA柱纯化后,免疫家兔,制备抗血清。结果扩增的ApoA-Ⅰ基因经测序,表明与GenBank中报道的序列(NM_009692)完全相同。重组表达质粒经酶切鉴定,证明构建正确。表达的ApoA-Ⅰ融合蛋白相对分子质量约为32000,表达量占菌体总蛋白的17%。纯化的融合蛋白纯度达90.7%,可与抗His·Tag单抗发生特异性反应。制备的抗血清可识别ApoA-Ⅰ融合...

• 出版日期2009
• 单位吉林大学; 中国人民解放军第二0八医院; 军事医学科学院军事兽医研究所