鸡细小病毒与禽呼肠病毒二重PCR检测方法的建立

作者：奉彬; 谢芝勋; 邓显文; 张艳芳; 黄娇玲; 王盛; 范晴; 谢志勤; 黄莉; 谢丽基; 曾婷婷; 罗思思; 刘加波

来源：动物医学进展, 2016, 37(11): 14-18.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2016.11.003

• 鸡细小病毒
• 禽呼肠病毒
• 二重PCR
• 特异性
• 敏感性

建立可同时检测鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)与禽呼肠病毒(Avian reovirus,ARV)的二重PCR方法,为防控ChPV与ARV提供技术支撑。根据鸡细小病毒NS1基因和禽呼肠病毒σC基因的保守序列,设计合成两对引物用于检测ChPV和ARV,通过优化二重PCR的反应体系,特异性、敏感性试验评价建立的ChPV与ARV二重PCR。优化后的二重PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5μL,其中ChPV与ARV的上、下游引物各1.0μL,混合模板2.0μL,ddH2O补足25μL;最佳的反应程序为:95℃5min;95℃1min,56.1℃1min,72℃1min,35个循环;最后72℃延伸10min。结果显示,建立的二重PCR能够同时扩增出204bp ChPV和405bp ARV片段;该方法对ChPV与ARV的检测敏感性分别达到58fg和53fg,但对鸡新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、马立克病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒等病原体均无特异性扩增,对ChPV与ARV混合感染的临床阳性病料的检测结果与各病毒单项PCR检测结果符合率为94%以上。建立的二重PCR可用于ChPV与ARV感染的快速鉴别诊断。

• 出版日期2016
• 单位广西壮族自治区兽医研究所