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摘要
本发明公开一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用。本发明主要包括Cas9表达载体的构建,大肠杆菌的转化,Cas9蛋白的诱导表达,Cas9蛋白的纯化,以及体内体外的应用。使用GB1作为促溶标签,可增加SpCas9的稳定性及溶解性,初步提高SpCas9的表达量,且GB1不影响SpCas9的功能,后续不需去除,简便可行。再通过使用10×His标记,有助于融合蛋白与Ni-NTA树脂的高亲和力,并有助于高盐洗去除污染的核酸,提高纯化效果。使用串联T7启动子,明显提高SpCas9的表达量。通过体内外应用,证明了所纯化得到的SpCas9-GB1蛋白正确折叠,具有切割DNA的能力,且可入核进行基因编辑。
- 出版日期2022-1-18
- 单位华南理工大学
