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摘要
旨在克隆山羊PSMD9基因序列并对其进行生物信息学分析，检测PSMD9在山羊各组织中的表达情况和肌内前体脂肪细胞不同分化时期的表达水平，并进一步揭示过表达和干扰PSMD9基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响。本研究以1周岁健康简州大耳羊公羊(n=12)为试验对象，采用T-A克隆技术获得山羊PSMD9基因序列，进行生物信息学分析，并通过双酶切方法构建PSMD9过表达载体。利用脂质体转染在山羊肌内脂肪细胞中过表达PSMD9,小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)干扰PSMD9表达。通过油红O染色法观察PSMD9对脂滴形成的影响，GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量；同时利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PSMD9在山羊不同组织中的表达水平和肌内前体脂肪细胞不同分化时期的表达水平。结果，获得山羊PSMD9基因核苷酸序列763 bp,其中5′UTR 67 bp, CDS区564 bp, 3′UTR 132 bp,编码187个氨基酸残基；山羊PSMD9基因在肝脏中的表达量最高，在脾脏中表达量最低，在诱导分化前4 d其表达水平随着山羊前体脂肪细胞分化而逐渐降低，随后上升，并在第8天表达量最高；过表达PSMD9基因，肌内前体脂肪细胞的脂滴明显增加，甘油三酯含量显著提高，同时可显著上调DGAT2、FASN和ACC的相对表达量，DGAT1、PPARγ和SCD1表达量无显著变化；干扰PSMD9基因肌内前体脂肪细胞脂滴减少，甘油三酯含量降低，同时可显著下调DGAT1、PPARγ、FASN和ACC表达量，DGAT2和SCD1无显著变化。本试验成功获得山羊PSMD9基因CDS区序列，其在肝脏组织中表达量最高，山羊PSMD9基因的表达随着肌内前体脂肪细胞的分化而逐渐降低，在第4天表达量最低，之后表达量逐渐升高，PSMD9的表达能够显著促进山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积，这些结果为进一步阐明PSMD9基因对调控山羊肌内脂肪形成的作用机制提供了重要数据支撑。
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