口蹄疫病毒O型、A型和Asia I型三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

作者：王翠; 赵雪丽; 王东方; 王淑娟; 马震原; 杨海波; 刘影; 柴茂; 谢彩华; 闫若潜^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-10.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230327.003

• 口蹄疫病毒
• 三重实时荧光定量RT-PCR
• 应用

为建立一种口蹄疫病毒（FMDV）O型、A型和Asia Ⅰ型三重实时荧光定量RT-PCR检测方法，本研究在比对多条FMDV基因的基础上，根据2B基因的最优保守区，设计O型、A型和Asia I型FMDV通用的反转录引物；再根据VP1基因的比对结果，以变异区为扩增靶区域，设计3对分别针对O型、A型和Asia Ⅰ型FMDV的特异性引物和TaqMan MGB探针。经优化反应体系和扩增程序等反应条件，建立一种基于探针技术的FDMV三重实时荧光定量RT-PCR检测方法。验证该方法的特异性、敏感性和重复性，对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测，并与基因测序方法及RT-PCR方法进行比较分析。本研究成功建立了FMDV三重FQ-PCR方法，实现了一步法对FMDV O型、A型和Asia Ⅰ型病原样品的鉴别检测。该方法可特异性扩增FMDV O型、A型和Asia Ⅰ型标准株细胞培养物，但对猪水疱性口炎病毒(VSV)等7种病原及阴性对照未出现扩增，特异性较强；对FMDV O型、A型和Asia Ⅰ型阳性重组质粒标准品的最低检出限均可达到10 拷贝/μL，敏感性较高；批内/批间试验变异系数在0.48%～1.55%，重复性较好；利用建立的三重FQ-PCR方法对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测，检测结果与基因测序结果完全一致，优于RT-PCR方法。本研究建立的三重FQ-PCR方法具有敏感性高、特异性强，在同一反应体系中能同时鉴别检测出FMDV O型、A型和AsiaⅠ型等优点，能满足临床鉴别检测的需求。

• 出版日期2023
• 单位河南省动物疫病预防控制中心