口蹄疫病毒NSP 3ABC基因在昆虫细胞中的分泌表达及其活性检测

作者：马江涛; 卢曾军; 曹轶梅; 郭慧琛; 郭建宏; 祝秀梅; 杨孝朴; 刘在新

来源：生物工程学报, 2007, (03): 540-545.

DOI：10.13345/j.cjb.2007.03.036

• 口蹄疫病毒
• 3ABC基因
• 杆状病毒
• 分泌性表达 FMDV
• 3ABC gene
• baculovirus
• secreted expression

用设计的特异引物,扩增得到了N-端带有6×His编码序列的口蹄疫病毒完整3ABC基因序列,并将其亚克隆入带有蜂毒溶血肽序列的穿梭质粒pMelBac-B中,构建了重组质粒pMel-3ABC。将该重组质粒与杆状病毒骨架DNABac-N-BlueTM共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒。重组病毒感染Sf9昆虫细胞,采用通过SDS-PAGE和Western blot检测,证明目的基因在昆虫细胞中得到了正确的表达,表达产物分泌至细胞培养上清中,并具有良好的生物活性。表达的目的蛋白经过镍柱亲和层析法纯化后,用间接ELISA方法检测与口蹄疫病毒感染动物血清的反应性...

• 出版日期2007
• 单位农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学