绿盲蝽膜结合型海藻糖酶ALTre-2基因表达、纯化及酶学特性

作者：谭永安; 肖留斌; 柏立新; 孙洋

来源：棉花学报, 2013, (05): 396-402.

• 绿盲蝽
• 膜结合型海藻糖酶
• 原核表达
• 酶学特性 Apolygus lucorum
• membrane-bound trehalase
• prokaryotic expression
• enzymatic characteristic

以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1.1 mg·mL-1的条件下,对纯化得到的重组ALTre-2蛋白进行活性检测,确定了其酶促反应的最佳pH和最适温度。试验结果表明:ALTre-2基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够高效表达一个约60 kD大小的蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及蛋白纯化获得了具海藻糖酶活力的重组蛋白;该重组ALTre-2蛋白在...

• 出版日期2013
• 单位江苏省农业科学院