ARF鸟苷酸交换因子BIGs对高尔基体相关的囊泡转运的调控作用

作者：林思思; 林巍; 王莹; 周春; 李翠限; 沈晓燕

来源：中山大学学报(医学科学版), 2012, 33(03): 311-315.

DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2012.0054

• RNAi
• BIGs
• 反面高尔基体网络
• 囊泡转运
• VSVG-YFP

【目的】探讨ARF鸟苷酸交换因子BIG1和BIG2在高尔基体相关囊泡转运方面的功能。【方法】利用脂质体将siRNA干扰序列转入细胞中,western blotting方法检测转染效率;利用细胞免疫荧光染色方法检测Hela细胞中BIGs蛋白水平的表达分布;采用Alexa568标记的转铁蛋白孵育Hela细胞,检测转铁蛋白相关的内吞体循环;利用脂质体转染VSVG-YFP病毒质粒,检测新生蛋白经从内质网经高尔基体转运至胞膜的途径。【结果】BIG1和BIG2的siRNA干扰效率均高于70%,且特异性良好;干扰掉BIGs后,细胞内TGN230结构变松散,呈现短片状或点状;干扰BIG2可导致细胞内转铁蛋白的积聚,而同时干扰BIG1则可进-步加剧转铁蛋白的积聚;BIG1或/和BIG2干扰均抑制了新生蛋白的从内质网向高尔基及细胞表面的转运过程。【结论】BIGs蛋白主要位于反面高尔基体网络,对维持其结构完整性非常重要;它们均参与调控高尔基体相关的囊泡转运,两者具有协同作用。

• 出版日期2012
• 单位中山大学