科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
背景：脐带间充质干细胞已被证明对软骨损伤有治疗作用，外泌体是脐带间充质干细胞在体内发挥治疗作用的主要载体。课题组前期发现LncRNA H19是介导脐带间充质干细胞外泌体调控软骨细胞活性的重要活性分子，LncRNA H19可以吸附miR-29b-3p从而促进软骨细胞的增殖再生，但是其下游机制仍未清楚。目的：从外泌体和LncRNAs角度揭示脐带间充质干细胞治疗软骨损伤的具体机制，为软骨损伤的治疗提供新的靶点。方法：构建稳定过表达LncRNA H19的脐带间充质干细胞，采用超速离心提取外泌体(H19-Exos)；采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot和外泌体摄取实验鉴定外泌体；通过Western blot、qPCR和双荧光素酶报告基因系统检测miR-29b-3p过表达和沉默对TGF-β1/Smad3通路的影响；通过特异性TGF-β1/Smad3抑制剂在体内外反向验证H19-Exos对软骨再生的生物学作用。结果与结论：(1)H19-Exos在电镜下为典型的杯状，粒径在130 nm左右，均表达CD63、CD81和TSG1010特性蛋白；(2)过表达miR-29b-3p可以同时下调TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白水平，而沉默miR-29b-3p后，TGF-β1、Smad3的mRNA和蛋白水平上调；(3)双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-29b-3p对下游靶基因TGF-β1和Smad3活性影响有显著差异；(4)膝关节腔内注射Ⅱ型胶原酶成功建立大鼠骨关节炎模型，H19-Exos可显著促进软骨再生，且特异性TGF-β1/Smad3抑制剂SB-431542在体内外均可阻断H19-Exos对软骨再生的生物学作用；(5)该研究系统论证了高表达LncRNA H19脐带间充质干细胞来源外泌体对软骨再生的促进作用，具体机制为LncRNA H19通过靶向miR-29b-3p/TGF-β1/Smad3通路促进软骨再生。
- 出版日期2024
- 单位北京积水潭医院; 苏州大学附属第三医院
