口蹄疫病毒前导蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：李娜; 袁红; 李平花; 孙普; 白兴文; 龚婷; 余琼; 朱国强; 李坤; 马雪青; 卢曾军; 包慧芳^*; 刘在新^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(10): 1215-1219.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0165

• 口蹄疫病毒
• 前导蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

前导蛋白(Lpro)是口蹄疫病毒(FMDV)编码的重要毒力因子,在拮抗宿主抗病毒反应中发挥多种功能。为了获得抗Lpro的抗体以研究Lpro的功能,本研究将L基因克隆到pET-28a(+)原核表达质粒中,构建了重组表达质粒pET-28a-L,转化至大肠杆菌BL21中进行重组蛋白的诱导表达,所获得重组His-Lpro主要以包涵体形式存在,利用Ni-NTA柱纯化获得了高纯度的His-Lpro,将His-重组Lpro与弗氏佐剂混合乳化后免疫新西兰大白兔,制备了高效价的Lpro兔多克隆抗体血清。通过免疫荧光试验(IFA)、免疫印迹试验(WB)检测Lpro兔多克隆抗体血清的反应原性。结果显示,该多抗血清能够特异性识别FMDV感染BHK21细胞后表达的Lpro,表明本研究制备的Lpro多抗血清具有很好的反应原性,为深入研究Lpro功能及其拮抗宿主天然免疫的作用机理奠定了基础。

• 出版日期2020
• 单位中国农业科学院兰州兽医研究所; 农业部; 河南牧业经济学院; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室