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摘要
背景:心血管并发症是糖尿病患者的主要并发症之一。糖尿病状态下,血管内皮细胞发生内皮间质转化（endothelial to mesenchymal transition,EnMT）。EnMT指内皮细胞失去其特异性抗原如VE-cadherin,CD31,VEGFR-1/2,而获得间质细胞抗原如α-Smooth muscle actin （α-SMA）,Ⅰ型和Ⅲ型胶原,同时在损伤部位出现脂质沉积、血小板黏附聚集、释放生长因子,引起血管壁增厚,发生形态学改变。环状RNA是一类新型非编码RNA,研究表明,环状RNA在心血管疾病中发挥了重要作用。mm9circ010056（ID:mmucirc0001572）的基因位置是chr7:66496336-66502587,宿主基因是Ube3a,其由Memczak S等人于2015年发现并发表于Nature上。目的:观察mm9circ010056对糖尿病诱导的动脉内皮细胞间质转化中的作用,其机制可能涉及Ube3a。方法:取自发性Ⅱ型糖尿病模型db/db小鼠（n=6）和野生型对照小鼠（n=6）胸主动脉,提取RNA;培养小鼠主动脉内皮细胞（mouse aortic endothelial cells,MAEC）,用重组晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）（0,50,100,200μg/mL）分别孵育4h,24h,48h。mm9circ010056过表达腺病毒和siRNA转染MAEC细胞,分别观察mm9circ010056对AGEs诱导的EnMT作用及对Ube3a表达的影响。Ube3a过表达慢病毒转染MAEC细胞,观察Ube3a对AGEs诱导的EnMT的作用。采用qRT-PCR和FISH检测mm9circ010056的表达;通过免疫荧光和Westrenblot检测CD31和α-SMA表达来评价EnMT的变化。结果:与野生型小鼠相比,db/db小鼠中mm9circ010056表达明显下调。AGEs呈浓度和时间依赖性地抑制MAEC细胞中mm9circ010056表达。MAEC细胞经AGEs诱导后,CD31表达明显下调,α-SMA表达明显上调。干扰mm9circ010056能诱导EnMT的发生;而采用腺病毒过表达mm9circ010056能上调Ube3a的mRNA表达水平。外源性的AGEs能抑制MAEC中Ube3a的表达,而过表达Ube3a能抑制AGEs诱导的EnMT的发生。结论:mm9circ010056参与调节糖尿病血管内皮细胞EnMT过程,其作用机制可能由其介导宿主基因Ube3a的表达来进行。
