大鼠ASIC1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其功能鉴定

作者：周仁鹏; 吴小山; 王志森; 谢亚亚; 李悦; 代贝贝; 王志强; 葛金芳; 陈飞虎

来源：安徽医科大学学报, 2016, 51(05): 620-624.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.05.003

• ASlC1
• 启动子
• 荧光素酶
• 报告基因

目的构建大鼠酸敏感离子通道1(ASIC1)基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-ASIC1-promoter,并进行功能的鉴定。方法设计、合成ASIC1启动子引物,采用聚合酶链反应(PCR)技术从大鼠全基因组DNA中扩增出ASIC1启动子片段;NheⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pGL3-Basic报告载体上;构建的pGL3-ASIC1-promoter重组质粒和pRLTK内参质粒瞬时共转染293T细胞检测ASIC1启动子活性。结果 PCR扩增得到大鼠ASIC1基因启动子片段;成功构建pGL3-ASIC1-promoter报告基因载体,菌落PCR和测序结果表明启动子DNA序列正确。与空质粒pGL3-Basic转染组相比,pGL3-ASIC1-promoter质粒转染组的荧光素酶活性明显增加(P<0.01)。结论成功构建了大鼠ASIC1基因启动子报告基因载体,为探究ASIC1转录表达的调控机制奠定基础。

• 出版日期2016
• 单位安徽医科大学