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摘要
目的构建含有胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和加强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的逆转录病毒载体,将其导入包装细胞PT67,检测基因在细胞中的表达。方法 PCR法扩增GDNF基因及IRES2-EGFP基因,测序验证正确后与逆转录病毒载体pLXSN连接,构建重组逆转录病毒质粒pLXSN-IRES2-EGFP-GDNF。EcoRI酶切鉴定重组质粒。脂质体Lipofectamine2000介导下转染包装细胞PT67,G418筛选并检测病毒滴度。流式细胞仪和荧光显微镜分别检测转染效率和基因表达。结果 PCR扩增得到大小约558bp和1308bp的特异性条带,测序证实,获得正确的人GDNF序列和EG...
