KAI1对视网膜母细胞瘤Y79细胞肿瘤转移相关基因表达的影响

作者：季迅达; 闫慧; 赵培泉

来源：中华眼科杂志, 2012, 48(12): 1097-1101.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2012.12.010

• 视网膜母细胞瘤
• 寡核苷酸序列分析
• 肿瘤转移
• 肿瘤细胞,培养的

目的 观察KAI1对视网膜母细胞瘤(RB) Y79细胞肿瘤转移相关基因表达的影响.方法 实验研究.分别用携带KAI1及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的慢病毒载体Lenti-MPKG及阴性对照载体转染RB细胞株Y79细胞.应用抗性药物嘌呤霉素结合荧光显微镜观察、筛选稳定且高表达KAI1的Y79细胞(Y79-KAI1)及其对照细胞(Y79-KAI1/zero).应用实时荧光定量PCR、免疫印迹法和细胞免疫荧光法检测Y79、Y79-KAI1和Y79-KAI1/zero细胞KAI1的表达水平.应用人肿瘤转移PCR芯片技术分析Y79-KAI1和Y79-KAI1/zero细胞转移相关基因的差异表达.3组细胞KAI1基因mRNA及蛋白表达的差异采用单因素方差分析进行比较.结果 成功建立了稳定且高表达KAI1的Y79-KAI1及其对照细胞Y79-KAI1/zero.实时荧光定量PCR检测结果显示,3组细胞KAI1基因mRNA相对值分别为183.67±21.20、1.42 ±0.55、1.00 ±0.00,Y79-KAI1细胞KAI1基因mRNA表达水平较对照Y79-KAI1/zero及Y79细胞显著增高(F=108.74,P=0.000).免疫印迹法检测结果显示,Y79-KAI1细胞KAI1蛋白表达水平明显高于Y79和Y79-KAI1/zero细胞(F=34.36,P=0.001).细胞免疫荧光染色结果显示,Y79-KAI1细胞质中有KAI1蛋白表达,围绕细胞核分布；Y79和Y79-KAI1/zero细胞中未检测到KAI1蛋白表达.PCR芯片技术共筛选肿瘤转移相关基因84个,其中上调表达2倍以上的基因共有7个,下调表达2倍以上基因的共有6个.结论 KAI1可导致Y79细胞部分肿瘤转移相关基因的表达水平改变,这些改变可能与KAI1抑制RB转移有关.

• 出版日期2012
• 单位上海交通大学医学院附属新华医院